微流控芯片在細(xì)菌檢測(cè)領(lǐng)域的應(yīng)用研究
微流控芯片是目前微全分析技術(shù)的研究熱點(diǎn)。微流控芯片分析技術(shù)是一門以芯片為實(shí)驗(yàn)平臺(tái),以分析化學(xué)作為基礎(chǔ),依托于微機(jī)電加工技術(shù),結(jié)合微管道網(wǎng)絡(luò)作為結(jié)構(gòu)特征,將生命科學(xué)為主要應(yīng)用對(duì)象的一種分析科學(xué)。微流控分析芯片最早在美國(guó)被稱為“芯片實(shí)驗(yàn)室”,在歐洲則被稱為“微整合分析芯片”,近年來(lái),伴隨著材料科學(xué)、微納米加工技術(shù)和微電子的發(fā)展,微流控分析芯片也進(jìn)行了快速式發(fā)展。
微流控芯片的優(yōu)點(diǎn)有:體積輕巧、樣品和試劑用量少,反應(yīng)迅速、大量平行處理及可拋棄式等。因此被廣泛應(yīng)用于生物技術(shù)研究的諸多方面,這其中也包括今天要說(shuō)的細(xì)菌檢測(cè)。
研究表明,用微流控芯片技術(shù)檢測(cè)食源性致病菌敏感度高。陳炯等利用微流控芯片技術(shù)檢測(cè)食物中的致性菌群,可以同時(shí)檢測(cè)出4種食品中常見的致性菌群,即霍亂弧菌、沙門氏菌、志賀氏菌和副溶血性弧菌。此方法對(duì)霍亂弧菌、沙門氏菌、志賀氏菌、副溶性弧菌分別達(dá)到100%、96.7%、100%,對(duì)4種菌株均具有較好的檢測(cè)效果。
國(guó)外有人研制出一種蛋白質(zhì)芯片,可用于篩選和鑒定沙門氏菌、大腸桿菌屬、葡萄球菌屬、彎曲桿菌屬和李斯特菌屬5種食品中的常見細(xì)菌。本發(fā)明的芯片對(duì)5種常見的致性有良好的識(shí)別能力。但是,Rwal等針對(duì)5種細(xì)菌的10種PCR檢測(cè)方法整合到微流控芯片中,發(fā)現(xiàn)微流控芯片中PCR的檢出率比PCR的檢出率低10倍。
微流程芯片技術(shù)是一種靈敏度高,特異性強(qiáng)的臨床細(xì)菌檢測(cè)技術(shù),除了相對(duì)節(jié)省時(shí)間外,每一個(gè)樣品的成本都比傳統(tǒng)方法要低,其中包括對(duì)處理微流程芯片的特殊設(shè)備以及用于存儲(chǔ)微流程芯片試劑的冰箱/冷凍室的要求。國(guó)外研究人員研究了用微流控芯片檢測(cè)軍人運(yùn)動(dòng)期間急性腹瀉的原因,結(jié)果發(fā)現(xiàn)與實(shí)時(shí)病原熒光PCR法檢測(cè)的結(jié)果一致。
李一偉提出了一種快速細(xì)菌檢測(cè)方法,以瓊脂糖微流控芯片為載體,將幾百微升的樣品富集到幾升的表皮升中,捕捉效率達(dá)90%。根據(jù)細(xì)菌密度計(jì)算出富集倍數(shù),其最大值可達(dá)1000萬(wàn)倍。尿樣品和尿樣品均可富集于瓊脂糖微流動(dòng)芯片中。最終結(jié)合熒光免疫染色,成功地檢測(cè)了患者的血樣中的葡萄球菌感染。
微流體芯片在細(xì)菌抗藥性檢測(cè)中也起著重要作用。中國(guó)學(xué)者李一偉為此建立了一個(gè)可定制的濃度梯度芯片,應(yīng)用于高通量的單細(xì)胞多藥耐受性分析。在此基礎(chǔ)上,采用分配通道長(zhǎng)度比來(lái)確定芯片形成的濃度梯度,從而保證了濃度梯度形成的穩(wěn)定性,簡(jiǎn)化了芯片設(shè)計(jì),便于集成化。這種芯片能分析單細(xì)胞乃至單細(xì)胞器中數(shù)百個(gè)細(xì)胞的多藥耐藥性,能實(shí)時(shí)監(jiān)控單細(xì)胞耐藥性。王歡將環(huán)形介導(dǎo)的等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)與紙片微流控芯片相結(jié)合,成功構(gòu)建了一種快速、簡(jiǎn)便的檢測(cè)耐亞胺培南銅綠假單胞菌OprL和OprD2基因的方法。對(duì)OprL和OprD2基因的早期識(shí)別,將有助于更好地選擇抗菌素療法的治療方案。